細(xì)胞的培養(yǎng)方法
以前認(rèn)為紅細(xì)胞、粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等血細(xì)胞都屬終末分化細(xì)胞，很難在體外培養(yǎng)生長(zhǎng)或僅能短期培養(yǎng)而不能傳代，近年來(lái)由于淋巴細(xì)胞培養(yǎng)基技術(shù)的發(fā)展，已有血細(xì)胞培養(yǎng)成功的報(bào)道，正常血細(xì)胞在體外培養(yǎng)生長(zhǎng)時(shí)間短，只有白血病細(xì)胞，血友病細(xì)胞、淋巴瘤細(xì)胞可培養(yǎng)成功并建立細(xì)胞系，但多半為EB病毒等致瘤病毒引起的轉(zhuǎn)化細(xì)胞，（EBNA檢查陽(yáng)性），二甲基亞砜（DMSO）處理也可誘導(dǎo)這些細(xì)胞分化發(fā)生逆轉(zhuǎn)，表現(xiàn)為正常細(xì)胞。所建立的細(xì)胞系多半為單核細(xì)胞系、B淋巴細(xì)胞系、T淋巴細(xì)胞系，只在IL-2產(chǎn)品問(wèn)世后，T細(xì)胞才可在體外建系、建株。
血細(xì)胞可從外周血中用梯度液通過(guò)離心分層后分離獲得。也可從脾臟、扁桃體、淋巴結(jié)中用機(jī)械法切碎過(guò)篩分離獲得淋巴細(xì)胞，從腹腔刺激后的沖洗液中可獲得大量的單核-巨噬細(xì)胞，從骨髓中可以獲得前提血細(xì)胞，并可培養(yǎng)生長(zhǎng)。加入生長(zhǎng)因子或某些物質(zhì)有利于細(xì)胞純化并促進(jìn)分化和生長(zhǎng)繁殖，例如在淋巴細(xì)胞中加入IL-2（TCGF），可促進(jìn)T細(xì)胞生長(zhǎng)，建立T淋巴細(xì)胞系。在多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞（B細(xì)胞）培養(yǎng)中，加B細(xì)胞生長(zhǎng)因子，可建立B細(xì)胞系；加入IL-6（或正常淋巴細(xì)胞培養(yǎng)48h的培養(yǎng)上清中的IL6）可使B細(xì)胞在體外培養(yǎng)，建立了IL-6依賴的B9細(xì)胞系。在骨髓單個(gè)核細(xì)胞培養(yǎng)中加入二羥基3,可使單個(gè)核細(xì)胞分化為成骨細(xì)胞及破骨細(xì)胞。
人臍帶血來(lái)源方便，采集容易，對(duì)母嬰均無(wú)傷害。近年來(lái)研究表明，臍帶血的血漿中富含許多高水平的造血活性物質(zhì)，具有刺激和促進(jìn)骨髓造血干/祖細(xì)胞增殖、分化和再植能力的功能，是造血生長(zhǎng)因子的重要來(lái)源。
臍帶血中富含類似于骨髓的造血干細(xì)胞，其中CFU-G、BFU-E、CFU-GM近似或高于正常成人骨髓和外周血中的造血干/祖細(xì)胞，比骨髓更原始，具有很強(qiáng)的自我復(fù)制和再植能力。臍帶血中還含有類似于骨髓的基質(zhì)細(xì)胞，對(duì)骨髓造血具有支持作用，在體外培養(yǎng)擴(kuò)增中具有更大的增值能力，是造血干細(xì)胞的理想來(lái)源，已被應(yīng)用于Fanconi貧血、某些白血病和惡性腫瘤的治療，并容易獲得骨髓造血功能的重建。
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