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　　為您介紹下白三烯D4Elisa試劑盒的實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)

　　ELISA是Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay的簡(jiǎn)稱，即酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定，是研究蛋白抗體的重要方法。它采用抗原與抗體的特異反應(yīng)將待測(cè)物與酶進(jìn)行直接或間接結(jié)合，然后通過酶與底物產(chǎn)生顏色反應(yīng)，進(jìn)行定性和定量分析。ELISA大致分為五種類型：直接法、間接法、競(jìng)爭(zhēng)法、夾心法、捕獲包被法。在商品化試劑盒中用得比較多的是雙抗體夾心法、競(jìng)爭(zhēng)法和間接法。

　　要做ELISA實(shí)驗(yàn)就少不了試劑盒，下面我們就以白三烯D4Elisa試劑盒為例，為大家介紹一下。

　　白三烯D4Elisa試劑盒除正常試驗(yàn)外，還需注意這幾個(gè)要點(diǎn)

　　1、樣品的濃度等指標(biāo)是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出來的，所以首先要把做標(biāo)準(zhǔn)曲線看作是比做正式實(shí)驗(yàn)還要重要的一件事，否則后面的實(shí)驗(yàn)結(jié)果無從談起。

　　2、設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品的標(biāo)準(zhǔn)濃度范圍要有一個(gè)比較大的跨度，并且要能涵蓋你所要檢測(cè)實(shí)驗(yàn)樣品的濃度，即樣品的濃度要在標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度范圍之內(nèi)，包括上限和下限。而對(duì)于呈S型的標(biāo)準(zhǔn)曲線，盡量要使實(shí)驗(yàn)樣品的濃度在中間坡度zui陡段，即曲線幾乎成直線的范圍內(nèi)。

　　3、試劑準(zhǔn)備：所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫，使用后請(qǐng)立即按照說明書要求保存。實(shí)驗(yàn)操作中必須使用一次性吸頭，避免交叉污染。

　　4、加樣：加樣時(shí)，要控制加樣速度，避免*孔與zui后一孔之見的時(shí)間間隔過大，否則將會(huì)導(dǎo)致不同的預(yù)孵育時(shí)間，從而影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性以及重復(fù)性；一般加樣時(shí)間控制在10分鐘內(nèi)，如果樣本數(shù)量過多，可使用多道移液器。

　　5、孵育：樣品要在密閉的容器內(nèi)進(jìn)行孵育，嚴(yán)格按照說明書上規(guī)定的孵育時(shí)間和溫度進(jìn)行。

　　6、洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中的殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，同時(shí)要消除板底殘留的液體和手指痕跡，避免影響zui后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。

　　7、反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，10分鐘左右)，如果顏色較深，請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)。

　　8、建議實(shí)驗(yàn)前預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過高，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，計(jì)算結(jié)果時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

　　9、建議使用白三烯D4Elisa試劑盒時(shí)先做預(yù)實(shí)驗(yàn)(即先做標(biāo)準(zhǔn)曲線，試用幾個(gè)標(biāo)本)，如果對(duì)本試劑盒有任何疑問，可和所購經(jīng)銷商，如果因運(yùn)輸過程導(dǎo)致試劑盒失效，可要求調(diào)換，但概不承擔(dān)產(chǎn)品本身以外的任何損失。