實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
公司細(xì)胞廣泛用于國內(nèi)院校的細(xì)胞生物學(xué)研究，作為實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目研究。下列產(chǎn)品詳細(xì)介紹：
產(chǎn)品名稱 | 生長特性 | 貨號 |
侵襲性脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞；MuM-2B | 貼壁生長 | EY-X63383 |
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細(xì)胞名稱 侵襲性脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞；MuM-2B
形態(tài)特性: 多角
生長特性: 貼壁生長
特征特性:
培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)10%FBS；20mMHepes
傳代方法: 1:3傳代；2~3天1次。
傳代情況: P21
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 培養(yǎng)法（-）
冷凍保存細(xì)胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作步驟:
1、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液，用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。
②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過細(xì)胞即可，室溫放置 0.5～2min， 不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來，吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過長，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落， 直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。1000～2000g 離心 1min，沉淀細(xì)胞，盡量去除細(xì)胞消化液后，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。
猴皮膚；RM-S1拉丁屬名: Sanghuangporus baumii2-(二-叔丁基膦)-2'-(N,N-二甲基氨基)聯(lián)苯Human SAMD4B ELISA Kit
恒河猴腎；RM-3拉丁屬名: Aspergillus flavus Link2-(二叔丁基膦)聯(lián)苯Human SAMD9 ELISA Kit
恒河猴腎；RM-2用途: 與大豆共生固氮,培養(yǎng)基pH4.5生長2-(二叔丁基膦)聯(lián)苯Human MVP(Major vault protein) ELISA Kit
SV40轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎；COS-1拉丁屬名: Debaryomyces hansenii3-氨基聯(lián)苯Human S100A3 ELISA Kit
恒河猴肺；RM-L1拉丁屬名: Aspergillus asperescens3-氨基聯(lián)苯Human SAMD9L ELISA Kit
恒河猴腎；MMK2注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用2-溴二苯并噻吩Human SAMHD1 ELISA Kit
EB病轉(zhuǎn)化的絨猴淋巴；B95-8拉丁屬名: Pleurotus porrigens (Pers. : Fr.) Gill.2-溴二苯并噻吩Human SACM1L ELISA Kit
恒河猴腎；RM-1拉丁屬名: Kocuria sp.(S)-(+)-香芹酮Human S100A5 ELISA Kit
獼猴胚胎來源拉丁屬名: Aspergillus nidulans(S)-(+)-香芹酮Human S100A3 ELISA Kit
非洲綠猴胚胎腎；marc145拉丁屬名: Corynebacterium ammoniagenesRetapamulinHuman SAMHD1 ELISA Kit
魚源用途: 教學(xué)研究3,5-二甲基-1-苯Human NEFL(Neurofilament light polypeptide) ELISA Kit
興國鯉尾鰭；XGL拉丁屬名: Dyadobacter soli3,5-二甲基-1-苯Human SACM1L ELISA Kit
高背鯽魚尾鰭；GBJd拉丁屬名: Chaetomium globosumBenfotiamineHuman S100A5 ELISA Kit
鯽魚腦星形膠質(zhì)系；CAA規(guī)格: 10ml4-(2-噻唑基偶氮)Human SAFB ELISA Kit
鯉魚尾鰭；YZ16拉丁屬名: Pseudomonas sp.4-(2-噻唑基偶
侵襲性脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞；MuM-2B犬C肽(C-Peptide)ELISA試劑盒HSF1ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
犬轉(zhuǎn)移生長因子β1(TGF-β1)ELISA試劑盒Hsp-20ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
犬肝素輔因子Ⅱ(HCⅡ)ELISA試劑盒hSP-20ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
犬血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)ELISA試劑盒HSP-20ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
犬促黃體生成激素(LH)ELISA試劑盒HSP-20ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
犬β內(nèi)啡肽(β-EP)ELISA試劑盒HSP-20ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
犬雌二醇(E2)ELISA試劑盒HSP-20ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
犬促卵泡素(FSH)ELISA試劑盒HSP-27ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
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