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產(chǎn)品名稱 | 肝癌細(xì)胞；BEL-7405 |
生長特性 | 貼壁生長 |
貨號(hào) | EY-X63548 |
細(xì)胞名稱 肝癌細(xì)胞；BEL-7405
形態(tài)特性: 上皮細(xì)胞樣
生長特性: 貼壁生長
特征特性:
培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)胎牛血清，10%
傳代方法: 消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長滿。
傳代情況: PN
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè): 陰性
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產(chǎn)品特點(diǎn):
1、 使用方便:不需昂貴設(shè)備。
2、 可以處理各種細(xì)菌菌體，包括新鮮菌液和冰凍菌體。
3、 將蛋白提取的時(shí)間縮短至30分鐘-1小時(shí)。
4、 采用溫和的中性裂解組分，保持蛋白活性。
5、 含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
6、 紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。
7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。
8、 本試劑盒中不有EDTA，與金屬螯和層析等兼容。
培養(yǎng)操作步驟 ：
1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；
4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
操作流程：
1.1主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長至60%～70%融合時(shí)，用0.25%消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生的細(xì)胞，以0.25％消化成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ，計(jì)算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生的細(xì)胞用消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。
ehydrogenase, mitochondrial) ELISA Kit
雜交瘤；1-PreS1（1-E6）拉丁屬名: Streptomyces griseus subsp. griseus藍(lán)五號(hào)鹽Human TERF1(omeric repeat-binding factor 1) ELISA Kit
雜交瘤；GPC3-7C8用途: 害蟲生物防治、油料作物促進(jìn)產(chǎn)量藍(lán)五號(hào)鹽Human TDRD3 ELISA Kit
雜交瘤；4.00E+10拉丁屬名: Massilia namucuonensis4-氯苯鹽酸鹽Human TDG ELISA Kit
小鼠雜交瘤；1B9拉丁屬名: Bacillus sp.4-氯苯鹽酸鹽Human TDRD5 ELISA Kit
小鼠腦瘤；MB39拉丁屬名: Staphylococcus arlettae4-氯苯鹽酸鹽Human TDP1(Tyrosyl-DNA phosphodiesterase 1) ELISA Kit
梅花鹿干擾素-γ單克隆抗體；CerIFN-γ4C拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae4-氟-3-硝基芐Human TEAD1 ELISA Kit
雜交瘤；2C5拉丁屬名: Rhizopus oligosporusSafinamide MesylateHuman TDRKH specific ELISA Kit
小鼠骨髓瘤；HcLF8拉丁屬名: Lactobacillus delbrueckii subsp lactic4-溴-4'-(二苯氨基)聯(lián)苯Human ALDH5A1(Succinate-semialdehyde dehydrogenase, mitochondrial) ELISA Kit
雜交瘤；AC-H12注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用4-溴-4'-(二苯氨基)聯(lián)苯Human TEAD2(TEA domain family member 2) ELISA Kit
雜交瘤；AC-G10拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae4-溴-2,5-二氟苯甲Human TEAD3 ELISA Kit
雜交瘤；1D9拉丁屬名: Aspergillus ficuum4-溴-2,5-二氟苯甲Human TCTN1 ELISA Kit
雜交瘤；WXR注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用4-溴-3,5-二氟苯甲Human TEAD4 ELISA Kit
雜交瘤；S-95-7拉丁屬名: Staphylococcus epidermidis4-溴-3,5-二氟苯甲Human ALDH16A1(Aldehyde dehydrogenase family 16 member A1) ELISA Kit
雜交瘤；1C11拉丁屬名: Mucor circinelloides2-溴-5-氟芐Human TEKT4 ELISA Kit
小鼠雜交瘤；PyQW20104E3拉丁屬名: Nocardioides ginsengagri2-溴-5-氟芐Human TCTN2 ELISA Kit
小鼠雜交瘤；PyXQ20092B12拉丁屬名: Escherichia coli (Migula) Caslani et Chalmers2-溴-4-氟-6-Human TDG ELISA Kit
小鼠雜交瘤；AFG20102G6拉丁屬名: Aspergillus
肝癌細(xì)胞；BEL-7405人PL7抗體/抗蘇氨酰tRNA合成酶(PL7)ELISA試劑盒rudimentalbovineserumalbumincheck-upELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人抗多發(fā)性肌炎硬皮病抗體(PM-Scl/PM-1)ELISA試劑盒RVAgELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人抗Q熱抗體(anti-Q-Ab)ELISA試劑盒RVIgMELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人異質(zhì)型核糖核蛋白復(fù)合物/抗RA33抗體(hnRNP/RA33)ELISA試劑盒S-100BELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人抗神經(jīng)元核抗體2型/抗Ri抗體(ANNA-2/Ri)ELISA試劑盒S-100BELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人抗Sa抗體(anti-Sa-Ab)ELISA試劑盒S-100BELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人抗sp100抗體(sp100)ELISA試劑盒S-100ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人抗浦肯野細(xì)胞抗體/抗Yo抗體(PCA-1/Yo)ELISA試劑盒S-100ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
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