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產(chǎn)品名稱 | 正常乳腺細胞；Hs578Bst |
生長特性 | 貼壁生長 |
貨號 | EY-X63491 |
細胞名稱 正常乳腺細胞；Hs578Bst
形態(tài)特性: 成纖維細胞
生長特性: 貼壁生長
特征特性: Hs578Bst來源于一個浸潤性導管癌(Hs578T的起源)旁的正常乳房組織。Hs578Bst可能是肌上皮起源的，因為它有與體內(nèi)的肌上皮中見到的類似的微絲和叢生的胞飲液泡。未觀察到橋粒，沒有雌激素受體蛋白，未檢測到內(nèi)生病毒。
培養(yǎng)條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；30ng/mlEGF
傳代方法: 消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長滿。
傳代情況: P(10+5)
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 陰性
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產(chǎn)品特點:
1、 使用方便:不需昂貴設備。
2、 可以處理各種細菌菌體，包括新鮮菌液和冰凍菌體。
3、 將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。
4、 采用溫和的中性裂解組分，保持蛋白活性。
5、 含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
6、 紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。
7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。
8、 本試劑盒中不有EDTA，與金屬螯和層析等兼容。
培養(yǎng)操作步驟 ：
1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
操作流程：
1.1主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細胞的復蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細胞48h換液1次，細胞長至60%～70%融合時，用0.25%消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散，為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞，待細胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細胞懸液，用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù)，按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液＝(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生的細胞，以0.25％消化成單細胞懸液，計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時隨機取出3瓶細胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞，加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ，計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生的細胞用消化制成單細胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔，計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。
rmIL-17F, CF (25 UG)細胞名稱: 小鼠淋巴瘤細胞；L-bFGF-5 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-17F (25 UG)細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞；
CHAPSO；[(膽固氨基)二甲基氨基]-2-羥基-1-磺酸IRS-1 (D23G12) Rabbit mAb1,12-二氨基十二烷
二硫赤蘚(D)；1,二硫代赤蘚VEGF Receptor 3 (C82A2) Rabbit mAbL-雙芐酯對甲磺酸鹽
N-硝基-L-甲酯YAP/TAZ (D24E4) Rabbit mAb (Biotinylad)1,6-二溴芘
N-甲酰-L-酯(BE)PSD95 (D74D3) XP® Rabbit mAbS-*基-L-半
AEBSF抑制劑PSD95 (D74D3) XP® Rabbit mAb(R)-吡咯烷
AEBSF(進分)α-Smooth Muscle Actin (D4K9N) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)2-氟-5-甲
鹽酸貝他定(進口)Drosha (D30F3) Rabbit mAb9-雙環(huán)[3.3.1]壬烷
鄰菲啰啉鹽酸鹽，一水MeCP2 (D4F3) XP® Rabbit mAb (PE Conjuga)1,雙(2,6-二異基)-4,5-二氫咪唑 四氟酸鹽
膦酰二肽鈉eIF3A (D51F4) XP® Rabbit mAb2,4,6-三氟甲酸
癸基喃葡萄糖;癸基吡喃葡萄糖苷eIF3A (D51F4) XP® Rabbit mAb2-氨基二甲酮
德羅特韋(GSK-1349572,DTG)eIF3H (D9C1) XP® Rabbit mAb2-氨基-酚
十二烷基吡喃葡萄糖苷；月桂酰基喃葡萄糖HIF-1β/ARNT (C15A11) Rabbit mAb氨基-酚
羥基纖維素(20000~30000 mpa.s)Acetyl-Histone H2B (Lys20) (D7O9W) Rabbit mAb酸鈉
羥基纖維素(5500-6500 mpa.s)Atg3 Antibody5-氨基-2-溴甲酸
羥基纖維素(40~60 mpa.s)Atg3 Antibody5-氨基-2-甲酸
異基-β-D-硫代半糖苷(IPTG)IKKε (D61F9) XP® Rabbit mAb氨基-甲氧基甲酸
甘露糖；D-甘露糖IKKε (D61F9) XP® Rabbit mAb2-氨基-5-酚
D-甘露糖(標準品)CTCF (D1A7) XP® Rabbit mAb甲
N-辛酰基-N-甲基葡糖(MEGA-8)Topoisomerase IIα (D10G9) XP® Rabbit mAb (PE Conjuga)1-氨基-2-甲基-2-
N-癸?；?N-甲基葡糖(MEGA-10)CTCF (D31H2) XP® Rabbit mAb3,環(huán)氧四
辛基-β-D-硫代吡喃葡萄糖苷CTCF (D31H2) XP® Rabbit mAb2-甲基-呋喃硫
D-綿子糖五水；蜜三糖五水Streptavidin (Sepharose® Bead Conjuga)3,(亞甲基二氧)
D-山梨Mouse IgG (Sepharose® Bead Conjuga)氧化環(huán)己
n-辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷(OGP)CNOT2 (D8Z8P) Rabbit mAbN-Boc-1,2,5,6-四氫吡啶-酸頻哪酯
L-核糖Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control (Sepharose® Bead Conjuga)D-阿拉伯糖
L-核糖(標準品)Phospho-HDAC4 (Ser632)/HDAC5 (Ser661)/HDAC7 (Ser486) Antibody十八烷基異酸酯
2-脫氧-L-核糖Phospho-Stathmin (Ser38) Antibody2-甲基基
甲基傘形酮-β-D-木糖苷NCoR1 (E4S4N) Rabbit mAb4,5,6,7-四氫噻吩[3,2-c]吡啶鹽酸鹽
2-脫氧-D-核糖Rad50 Antibody鄰/對甲磺酸甲酯
D-半糖(標準品)Rad50 Antibody基肼鹽酸鹽
D-半糖Phospho-53BP1 (Thr543) Antibody三氮唑
鹽酸肼;雙鹽酸肼Phospho-NuMA (Ser395) Antibody6,7-二甲氧基-2,喹唑啉二酮
羥基灰石RhoC (D40E4) Rabbit mAb方酸
羥基纖維素(粘度11250-21000mPas)RhoC (D40E4) Rabbit mAb二異尿酸鈉
羥基纖維素Id2 (D39E8) Rabbit mAbFmoc-
羥基纖維素(30000 mpa.s)Cytokine Receptor Common beta-Chain Antibody吡 rmIL-17 RD/SEF, CF (50 UG)細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞；HBKC-48 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
正常乳腺細胞；Hs578Bst人軟骨糖蛋白39(HCgp-39)ELISA試劑盒NeuronalChemorepellentSlit2ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人溶酶體相關(guān)膜蛋白2(HLAMP-2)ELISA試劑盒NFELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人膠原吡啶交聯(lián)(PYD)ELISA試劑盒NF-κBp65ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人脫氧膠原吡啶交聯(lián)(DPD)ELISA試劑盒NF-κBp65ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人羥基膠原吡啶交聯(lián)(OH-PYD)ELISA試劑盒NF-κBp65ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人螺旋肽(HelicalPeptide)ELISA試劑盒NF-κBp65ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人Ⅱ型膠原螺旋肽(HELIX-Ⅱ)ELISA試劑盒NGALELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人基質(zhì)裂解蛋白(MAT)ELISA試劑盒NGALELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
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